Аи T-метод

Аи T-метод * Aі T-метад * A and T method — метод клонирования случайных фрагментов ДНК, при котором случайные последовательности ДНК, полученные в результате механического или ультразвукового дробления, обрабатываются эндонуклеазой I, чтобы получить однонитевые 31-концы. На этих 31-концах наращивается последовательность из аденозина. В то же время, на конце вектора создается последовательность из тимина, в результате чего случайная последовательность и вектор могут объединяться за счет комплементарного связывания А-Т. Если концы из А-Т длинные, то молекула получается стабильной и не нуждается в обработке лигазой перед использованием ее для трансформации организма-хозяина. Преимущество данного метода состоит в том, что можно клонировать действительно случайные фрагменты, а недостаток — в сложности изъятия вставки из рекомбинантной молекулы. В то же время, т. к. разрушение связей dA-dT происходит при низкой температуре, этот фактор может быть использован для частичной денатурации с последующим разрезанием специфической эндонуклеазой типа S1.